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實驗室質控菌株復蘇保存相關常見問答

發布時間:2019-09-11    瀏覽次數:210

微生物實驗室如果從事致病菌檢測、培養基質控驗收、方法驗證等相關工作,就應該備有質控菌株。實驗室需對使用的質控菌株進行規范性管理,以便有效地、安全地使用,保證實驗結果的準確性,今天環凱為大家總結了實驗室質控菌株復蘇保存過程中常見的問題。

1. 菌株保存的是第三代,-80℃保存,再取出來活化的話屬于第幾代?

保存的是第三代復活出來后,如果采用平板或肉湯活化相當于轉接了一代,就是第四代了,如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數。如果是保存在斜面上,這一支斜面一直就是第三代,如果轉接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則,菌株活化復蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代,需要注意。

2. 菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎?

不一定非挑單菌落,但是一定要挑相同特征的菌落,就是說從同一個菌落純化出來的,以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑,寧多勿少。

3. 菌株冷凍保存是-70℃還是-80℃有具體標準規定么?

其實是有標準的,《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規保藏技術規程》是關于菌株保藏的一個標準,大家可以學習一下,各個保存方式都有介紹,但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時里面還沒有收錄。

4. 怎樣延長菌株的保存時間呢?

大量的實驗證明菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養的條件下保存效果是最好的,越接近這種保存條件,菌株的保存時間越長。

5. 怎樣純化菌株?

純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉挑取單菌落劃線再分離出單菌落,這就相當于純化了。

6. 我們只保存第一代菌株是不是要重新傳代保存呢,認證老師會不會認為這是個錯誤?

應該不會,認證老師不會提出這種問題的,不過最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些,使用時工作菌株最好使用第三代菌株,第一代菌株可作為長期保存用。

7. 為何要將第三代作為工作菌株?

多傳代幾次后菌株的活力會明顯提高,但最多傳代到第五代后就不能用了,因為第五代后菌株雖然不會完全變異,但變異率會明顯增加,因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的,若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強。

8. 質控菌株是不是傳代超過五代就必須銷毀處理?

不一定。傳代超過五代只是存在菌種變異可能,但如果傳代到第六代、第七代……,經過形態、生化特性、DNA特征等驗證,性狀保持穩定,那么這些五代后的菌還是可以正常使用。

9. 菌種編號意義?

以金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003為例CMCC為中國醫學菌種保藏中心縮寫,其它常見菌種保藏中心還包括ATCC(美國標準菌種收藏所)、CICC(工業微生物菌種保藏中心)、FSCC(食品安全菌種保藏中心);B的意思是細菌,對應還有F(真菌);26003為CMCC的保藏編號。

10. 同樣是金黃色葡萄球菌,ATCC6538與ATCC25923有什么不同?

表明其來源不同,生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力較ATCC25923要強。

11. 使用磁珠保藏管保存質控菌株,加入菌液搖勻后為什么要吸干菌液?

防止剩余菌液冷凍后形成冰晶損傷保存的菌株。

12. TSA斜面一般多少度保存,可以放在冷藏里嗎?

2-8℃保存,放在冷藏是可以的;注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存,否則會很快死亡。

13. 復蘇凍干菌株是否可以采用液體培養基?

可以,但建議使用平板培養基復蘇凍干菌株。有助于分辨復蘇出來菌株是否有污染,同時可初步觀察菌落形態以鑒定菌株純度。使用液體復蘇的話只能觀察到培養基混濁,無法確定是否有污染。

14. 復蘇凍干菌株是否可以采用顯色培養基?

不建議采用顯色培養基復蘇凍干菌株。凍干菌株復蘇需要一個最適生長環境,復蘇培養基不能選用選擇性培養基或顯色培養基,這些培養基里面含有抑菌成分不利于菌株復蘇。

15. 產氣莢膜梭菌做凍存時是否需要保持厭氧狀態?

不需要,產氣莢膜梭菌雖屬厭氧性細菌,但對厭氧程度要求并不太嚴格,按照一般菌株凍存方法進行凍存即可。

菌種保藏





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